Cromatografía en columna

cual pasa la FM por efecto de la gravedad o de una presión aplicada.

La elución implica el transporte de una especie a través de una columna por la adición de nueva fase móvil.

El eluyente (la parte de la muestra contenida en la FM) desciende por la columna, donde tiene lugar un reparto o distribución entre la FM y la FE, en una serie continua de transferencias entre las dos fases. Según sea el coeficiente de reparto, los solutos estarán más o menos tiempo en la fase móvil, que es la que consigue hacerlos avanzar.

 Por tanto, cuanto más tiempo pasen en la fase móvil, más rápidamente se moverán. Los solutos que presenten una mayor afinidad por la FE quedarán más tiempo retenidos, por lo que avanzarán a menor velocidad.

La diferencia en la velocidad de desplazamiento de los solutos o analitos permite su separación en zonas o bandas a lo largo de la columna. A medida que se va añadiendo más FM a la columna, las bandas van llegando individualmente al final de la columna y son eluidas. La fracción eluida se denomina eluato.

Si al final de la columna se coloca un detector que responde a la concentración del soluto y se registra su señal en función del tiempo (o del volumen de FM añadido) se obtiene un cromatograma. Lógicamente, el proceso de separación produce una dilución considerable del analito, por lo que los detectores empleados deben ser más sensibles que los que serían necesarios si el proceso de separación no fuera imprescindible.